DIGITONIN细胞质膜通透处理液产品说明书中文版

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   DIGITONIN细胞质膜通透处理液产品说明书 

主要用途

   DIGITONIN细胞质膜通透处理液是一种旨在通过温和的非离子性去垢剂处理，形成膜孔，获得通透的常用技术方法。该方法经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种免疫检测、蛋白和分子转运等的前处理。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，效果明显。

技术背景

细胞质膜通透技术（plasma membrane permeabilization technique ）是一种使各种类型细胞的质膜形成孔隙，从而获得外源性分子进入细胞内部，以控制细胞内的生理活动的实验技术。通常的通透方法包括电击通透（electropermeabilization）、去垢剂通透、膜穿孔毒素（pore forming toxin）通透等。其中毛地黄皂苷（digitonin）是一种螺甾烷皂苷（SpirostanSaponin），分子式C₅₆H₉₂O₂₉ 温和的非离子甾类糖苷（steroid glycoside）去垢剂，常用于膜蛋白或受体溶解、线粒体分离、胆固醇定量，以及质膜通透。细胞通透后，形成较大的膜孔，允许较大的分子，例如酶、抗体等导入进细胞内。用于各种检测，包括免疫检测，酶活检测等。

产品内容

  清理液（Reagent A）              毫升

  处理液（Reagent B）              毫升

产品说明书                 1份

保存方式

保存在—20℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

2毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

操作步骤

一、 贴壁细胞处理

1． 准备1个细胞培养48孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项6）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 小心沿着孔壁加入500微升  清理液（Reagent A）到1个细胞培养孔，覆盖细胞表面

4． 小心抽去  清理液（Reagent A）

5． 小心沿着孔壁加入xx微升室温预热的  处理液（Reagent B）到1个细胞培养孔，覆盖细胞表面

6． 室温下孵育10分钟

7． 小心抽去  处理液（Reagent B）

8． 小心沿着孔壁加入xx微升  清理液（Reagent A）到1个细胞培养孔，覆盖细胞表面

9． 小心抽去  清理液（Reagent A）

10． 重复实验步骤8至9二次

11． 继续后续操作

二、悬浮细胞处理

1． 准备1管10⁶的待测细胞

2． 转移到2毫升离心管

3． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g

4． 小心抽去细胞培养液

5． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

6． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g

7． 小心抽去  清理液（Reagent A）

8． 小心加入xx微升室温预热的  处理液（Reagent B），混匀细胞颗粒群

9． 室温下孵育10分钟

10． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g

11． 小心抽去  处理液（Reagent B）

12． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群

13． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g

14． 小心抽去  清理液（Reagent A）

15． 重复实验步骤12至14二次

16． 继续后续操作

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 本产品可以用于免疫染色的通透处理、受体实验、转运实验等

3． 操作时，须戴手套

4． 操作时，避免污染母液

5． 用户根据细胞特性，可以稀释  清理液（Reagent A）

6． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：

7． 本公司提供系列质膜通透处理试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定通透稳定