细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂盒中文版

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  细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

  细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂是一种旨在使用铁还原法技术，分析细胞样品中晚期脂褐素沉积现象，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的而经典的技术方法。该技术经过精心改良SCHMORL方法、成功实验证明的。主要适用于动物细胞的晚期脂褐素检测。广泛应用于细胞生物学研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。  

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，其中脂褐素颗粒聚集增多成为细胞衰老的特征性生物学标记。脂褐素（lipofusin），又称为“磨损（wear and tear）"色素，是一种细胞内与年龄相关的棕黄色荧光胞浆颗粒色素，主要在有丝分裂后细胞的继发性溶酶体内。脂褐素常见于老年人的永恒性非分裂性组织细胞里，例如心脏、肝脏和神经等，尤其在衰老诱导的细胞退变中聚集增多，特别是的组织。脂褐素来自于氧化的蛋白和脂质，成为细胞衰老中后期的独立指征。脂褐素分为早期和晚期，晚期脂褐素作为较强还原性物质，在铁离子的存在下，使铁（ferricyanide）转化为亚铁（ferrocyanide），产生不可溶性普鲁士蓝（Prussian blue）产物，显示蓝色。

产品内容

  清理液（Reagent A）              毫升

  固着液（Reagent B）          毫升

  染色液（Reagent C）          毫升

  酸性液（Reagent D）          毫升

产品说明书               1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；   染色液（Reagent C）避免光照；有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于细胞染色操作

光学显微镜：用于观察染色后的细胞

实验步骤

操作一：细胞载玻片染色

1． 取出待测的细胞载玻片或细胞涂片 

2． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面

3． 小心移去载玻片上的  清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升  固着液（Reagent B）在载玻片上，铺满整个样品表面

5． 在室温下孵育5分钟

6． 小心移去载玻片上的  固着液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗样品表面

8． 在室温下孵育2分钟

9． 小心移去载玻片上的  清理液（Reagent A）

10． 小心加上xx微升  染色液（Reagent C）在载玻片上，铺满整个样品表面

11． 在室温下孵育10分钟

12． 小心移去载玻片上的  染色液（Reagent C）

13． 小心将载玻片置入xx毫升  清理液（Reagent A）的小型染色缸里 

14． 室温下孵育2分钟

15． 取出载玻片，小心移去载玻片上的  清理液（Reagent A）

16． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个样品表面

17． 在室温下孵育5分钟

18． 小心移去载玻片上的  酸性液（Reagent D）

19． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗样品表面

20． 小心移去载玻片上的  清理液（Reagent A）

21． （选择步骤）复染（建议使用  核固红复染试剂盒——   40011）

22． 放上盖玻片或封片（水相或中性树脂）

23． 即刻在一般光学显微镜下观察（注意：参见注意事项3）：脂褐素阳性细胞呈现蓝色，细胞核呈现红色（如果复染）

操作二：24孔细胞培养板染色

1． 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3． 小心抽去每孔里的  清理液（Reagent A）

4． 每孔加入xx微升  固着液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5． 在室温下孵育5分钟

6． 小心抽去每孔里的  固着液（Reagent B）

7． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8． 在室温下孵育2分钟

9． 小心抽去  清理液（Reagent A）

10． 每孔加入xx微升  染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面

11． 在室温下孵育10分钟

12． 小心抽去  染色液（Reagent C）

13． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗细胞表面

14． 在室温下孵育2分钟

15． 小心抽去  清理液（Reagent A）

16． 重复实验步骤13至15二次

17． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D），覆盖整个生长表面

18． 室温下孵育5分钟

19． 小心抽去  酸性液（Reagent D）

20． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

21． 小心抽去  清理液（Reagent A）

22． （选择步骤）复染（建议使用  核固红复染试剂盒— 40011）

23． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

24． 即刻在一般光学显微镜下观察（注意：参见注意事项3）：脂褐素阳性细胞呈现蓝色，细胞核呈现红色（如果复染）

注意事项

1． 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作

2． 本产品还可以染色其它还原性物质，包括黑色素（melanin）、肝胆汁（liver bile）、肠嗜铬细胞（enterochromaffin）等

3． 本产品不同于其它脂褐素组化染色，其基于生化反应产生的显色反应，与样品的关联性很强。样品的状态，例如新鲜与否、置于空气时长等，会严重影响染色效果

4． 操作时，须戴手套

5． 使用时，避免污染母液

6．   染色液（Reagent C）避免光照

7． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

8． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

9． 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定着色清晰