使用苏木素伊红染色液试剂盒体外诊断试剂后还可以进行免疫染色或其它染料的复染

　　随着我国临床诊断需求的不断增长，以及研发技术的不断提高，体外诊断(IVD)行业已经成为我国医药行业中发展zui快，也zui活跃的细分行业之一。虽然目前我国体外诊断行业尚处于发展初期，但其发展一直受国家产业政策重点支持。将体外诊断试剂、诊断仪器、诊断相关酶制剂等产业的发展列为重点发展项目，将体外诊断列为战略性新兴产业。

　　苏木素伊红染色液试剂盒体外诊断试剂断行业包括仪器、试剂和耗材，其中IVD市场80%是试剂，本报告以诊断试剂为主，兼顾部分耗材情况，较少讨论诊断仪器。

　　苏木素伊红染色液试剂盒体外诊断试剂是一种碱性染料，同媒染剂（常用的是三价的铁或铝的盐）一起使用，能够使细胞核染色。苏木素和氧化苏木素都没有染色能力，但与媒染剂结合形成色淀（lake），这种色淀具有染色能力。核、染色体、着丝粒、中心体、线粒体、髓鞘等可被染成蓝色以至黑色。与伊红合用的苏木素-伊红双重染色法是zui基本的一般组织的染色法，苏木素染色原理如下：

　　苏木素和伊红在组织学上被经常使用，碘液不同，这是一种*染色街。其他常用的含有苏木素的染色剂有磷钨酸苏木素染色剂，也就是磷钨酸与苏木素的混合物。苏木素染色剂经常为组织的研究使用。明矾和三价铁盐常常被用作媒染剂，展示核和细胞质结构。这些媒染剂的原理都是形成媒染剂－染料－组织复合体，从而显示颜色。

　　苏木素染色内质呈淡蓝黑色，外质收缩，剩下部分不着色或色泽更浅。圆形细胞核呈蓝黑色。居中的核仁呈黑色小圆点。核膜较薄，其内侧缘均匀，整齐地排列着一层细小的染色质粒。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红细胞呈蓝黑色采用苏木素染色液进行免疫染色后的复染，操作步骤简便，操作时间短。可以操作步骤简便，操作时间短或培养细胞的染色，或与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。使用苏木素染色液染色后还可以进行免疫染色或其它染料的复染。

　　1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3、尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　6、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

　　7、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　苏木素伊红染色液试剂盒体外诊断试剂操作步骤：

　　1、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

　　2、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育：操作同3。

　　8、洗涤：操作同5。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。

　　11、苏木素伊红染色液试剂盒体外诊断试剂盒测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。