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一般情况纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒使用标准
点击次数:437 发布时间:2018-06-15
   在我国,纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒是指:可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用, 在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中, 用于对人体样本( 各种体液、细胞、组织样本等) 进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品( 物) 、质控品( 物)等。
  随着我国临床诊断需求的不断增长,以及研发技术的不断提高,体外诊断(IVD)行业已经成为我国医药行业中发展zui快,也zui活跃的细分行业之一。虽然目前我国体外诊断行业尚处于发展初期,但其发展一直受国家产业政策重点支持。“十一五”期间,国家“863”计划支持了生物医学关键试剂的重点项目,2005年以来,政府相关部门更是相继出台了多项政策,将体外诊断试剂、诊断仪器、诊断相关酶制剂等产业的发展列为重点发展项目,将体外诊断列为战略性新兴产业。
  纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒内质呈淡蓝黑色,外质收缩,剩下部分不着色或色泽更浅。圆形细胞核呈蓝黑色。居中的核仁呈黑色小圆点。核膜较薄,其内侧缘均匀,整齐地排列着一层细小的染色质粒。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红细胞呈蓝黑色采用苏木素染色液进行免疫染色后的复染,操作步骤简便,操作时间短。可以操作步骤简便,操作时间短或培养细胞的染色,或与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。使用苏木素染色液染色后还可以进行免疫染色或其它染料的复染。
  1、冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉;
  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟;
  4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用;
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干;
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外;
  7、温育:操作同3;
  8、洗涤:操作同5;
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟;
  10、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色);
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值,测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒操作步骤:
  1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
  2、纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:操作同3。
  8、洗涤:操作同5。
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  11、纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  1、血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  3、尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  5、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  6、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
  7、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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