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冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒的技术背景

更新时间:2021-08-25  |  点击率:611

    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒是一种旨在使用细胞色素C催化人工电子供体染料二氨基联苯胺的非酶源性自然氧化,形成棕褐色不溶性产物,以及使用合成电子受体四氮唑兰染料,通过反应呈现出蓝色沉淀现象,来分析冰冻组织样品中细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶双酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻动物组织的细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性的定性检测。适宜于线粒体疾病和肌肉分型的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,显色清晰。

    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒的技术背景:

    肌肉组织细胞中含有氧化酶,包括细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶和NADH四氮唑兰还原酶(NADH-TR)等,通过组织化学染色,可以呈现低含量(阴性染色)和高含量(深度染色)线粒体状况,由此分辨肌纤维类型和识别线粒体肌病(myopathy)。细胞色素氧化酶(Cytochromeoxidase)是氧化呼吸链的酶部分的总称。其存在于真核生物的细胞线粒体上,主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)是人工电子供体染料,通过与金属蛋白,例如含铁蛋白细胞色素C中的物理性结合,产生非酶源性自然氧化,同时提供电子(细胞色素C作为电子受体)于呼吸链的电子传递系统,由此呈现出颜色变化和沉积,形成棕褐色不溶性产物。在DAB自然氧化的同时,产生活性氧,例如过氧化氢,由过氧化氢酶防止其聚集。在大量氧化型DAB的存在下,通过细胞色素氧化酶的作用,亚铁细胞色素C被氧化成正铁细胞色素C。由此氧化型DAB棕褐色不溶性产物被用于检测组织细胞中细胞色素氧化酶的活性。琥珀酸脱氢酶(succinnatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循环(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素,位于线粒体内膜,参与细胞呼吸链。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反应,产生延胡索酸(furmarate),通过黄素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理,使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑(NitroBlueTetrazolium;NBT),接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的电子,而被还原,产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。使用双酶染色,可以有效地筛选线粒体疾病和进行肌纤维分型。
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