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真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂盒

更新时间:2020-05-08  |  点击率:1604

真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂盒产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

  真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中DNA结合SYTOX绿色染料程度,来定量DNA含量,以进一步获取细胞周期分布状况的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞,包括芽殖酵母、裂殖酵母等的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌,即到即用,分辨率高,操作简捷,性能稳定。

技术背景

 

芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母(Schizosacchromyces pombe)是研究真核生物细胞周期的模式生物。细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料,借助细胞流式仪,测定出DNA含量,根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化,来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY)是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰(sub-G1)细胞群。SYTOX绿色染料具有不受细胞数量变化、染料浓度变化、细胞形态和大小变化,以及细胞培养液不同等影响,且不易渗漏等优点。

产品内容

 

  清理液(Reagent A)     毫升

  固着液(Reagent B)     毫升

  抗干扰液(Reagent C)     毫升

  酶解液(Reagent D     毫升

  染色液(Reagent E     毫升

产品说明书     1份

保存方法

保存  抗干扰液(Reagent C)  酶解液(Reagent D)和  染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;  染色液(Reagent E避免光照,有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

2毫升离心管:用于细胞染色的容器

(微型)台式离心机:用于样品操作操作

培养箱或恒温水槽:用于反应孵育

细胞流式仪:用于细胞荧光分析

实验步骤

  • 准备好5 X 106的待测真菌/酵母细胞 
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx毫升  清理液(Reagent A)到15毫升锥形离心管混匀
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g 
  • 小心抽去上清液
  • 缓慢加入xx毫升预冷的  固着液(Reagent B)且涡旋震荡混匀
  • 放进4℃冰箱里孵育16小时
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g 
  • 小心抽去固着液
  • 加入xx毫升  清理液(Reagent A)到15毫升锥形离心管混匀
  • 移入到2毫升离心管
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
  • 重复清洗一次
  • 加入xx微  抗干扰液(Reagent C混匀
  • 放进37恒温水槽,孵育2至16小时
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
  • 加入xx微  酶解液(Reagent D混匀
  • 放进37恒温水槽,孵育20分钟
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g
  • 加入xx微  清理液(Reagent A)混匀
  • 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为16000g 
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微升  染色液(Reagent D),混匀细胞颗粒群
  • 超声处理100瓦,30%功率,15秒
  • 在暗室里37培养箱里孵育30分钟
  • 移入到细胞流式仪测试管(可放进4℃冰箱里待测)
  • 即刻进行细胞流式仪分析:波长488nm氩离子激光出现绿色荧光(或488nm激发波长,530nm散发波长)观察50000个细胞以上

注意事项

  • 本产品为50次操作
  • 操作时,须戴手套
  • 孵育时,必须避免光照
  • 建议细胞染色完成后,即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测,不要超过1周
  • 细胞流式仪分析前,须混匀内容物,或超声处理,避免细胞成团
  • 细胞检测量不得少于10000个
  • 告知流式仪技术员有关细胞类型
  • 使用未经染色的细胞进行FSC与SSC设定,然后将染色细胞调整到未经染色细胞的水平,包括FL1、FL2、FL3的PMT
  • 建议设定:

Detector FSC E00  Gain:2

Detector FL1-A Voltage:400  Gain:4

流速:500/秒

  • 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定荧光清晰
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