铭修生物实验室-空肠弯曲菌的鉴定

铭修生物实验室-空肠弯曲菌的鉴定

5.4.1.1 概述 挑取5个（如少于5个则全部挑取）或更多的可疑菌落接种到哥伦比亚血琼脂平板上，微需氧条件下42 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，按照5.4.1.1～5.4.1.5进行鉴定，结果符合表1的可疑菌落确定为弯曲菌属。 表1 弯曲菌属的鉴定项目 弯曲菌属特性 形态观察 革兰氏阴性，菌体弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时呈S形、螺旋状或海鸥展翅状a 动力观察 呈现螺旋状运动b 氧化酶试验 阳性 微需氧条件下25 ℃±1 ℃生长试验 不生长 有氧条件下42 ℃±1 ℃生长试验 不生长 a有些菌株的形态不典型。 b有些菌株的运动不明显。 5.4.1.2 形态观察 挑取可疑菌落进行革兰氏染色，镜检。5.4.1.3 动力观察 挑取可疑菌落用1mL 布氏肉汤悬浮，用相差显微镜观察运动状态。5.4.1.4 氧化酶试验 用铂/铱接种环或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶试剂润湿的滤纸上，如果在10s内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性。5.4.1.5 微需氧条件下25 ℃±1 ℃生长试验 挑取可疑菌落，接种到哥伦比亚血琼脂平板上，微需氧条件下25 ℃±1 ℃培养44 h±4 h，观察细菌生长情况。5.4.1.6 有氧条件下42 ℃±1 ℃生长试验 挑取可疑菌落，接种到哥伦比亚血琼脂平板上，有氧条件下42 ℃±1 ℃培养44 h±4 h，观察细菌生长情况。5.4.2 空肠弯曲菌的鉴定 5.4.2.1 过氧化氢酶试验 挑取菌落，加到干净玻片上的3%过氧化氢溶液中，如果在30s内出现气泡则判定结果为阳性。5.4.2.2 马尿酸钠水解试验 挑取菌落，加到盛有0.4 mL 1%马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后在36 ℃±1 ℃水浴中温育2 h或36 ℃±1 ℃培养箱中温育4 h。沿着试管壁缓缓加入0.2 mL茚三酮溶液，不要振荡，在36 ℃±1 ℃的水浴或培养箱中再温育10 min后判读结果。若出现深紫色则为阳性；若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。5.4.2.3 吲哚乙酸酯水解试验 挑取菌落至吲哚乙酸酯纸片上，再滴加一滴灭菌水。如果吲哚乙酸酯水解，则在5 min～10 min内出现深蓝色；若无颜色变化则表示没有发生水解。空肠弯曲菌的鉴定结果见表2。 表2 空肠弯曲菌的鉴定特征 空肠弯曲菌 （C. jejuni） 结肠弯曲菌 （C. coli） 海鸥弯曲菌 （C. lari） 乌普萨拉弯曲菌 (C. upsaliensis) 过氧化氢酶试验 ＋ ＋ ＋ －或微弱 马尿酸盐水解试验 ＋ － － － 吲哚乙酸脂水解试验 ＋ ＋ － ＋ 注：＋表示阳性；－表示阴性。