石蜡切片免疫组化实验-卵白素-生物素-过氧化物

石蜡切片免疫组化实验-卵白素-生物素-过氧化物

实验材料　蜡块切片
 

试剂、试剂盒
 

多聚甲醛　蒸馏水　蔗糖　过氧化氢　甲醇　PBS　酒精　KPBS　牛血清白蛋白　叠氮纳　一抗　二抗
 

仪器、耗材
 

冰箱　显微镜　烧杯
 

实验步骤
 

1.  4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中*。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后；
 

2.  加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢）30 min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01 M  PBS清洗5 min×3；
 

3.  加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01 M  KPBS 100 ml）30 min，以增加细胞的通透性，0.01 M KPBS清洗5 min×3；
 

4.  加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00 g+0.01 M PBS 100 ml+叠氮纳0.08 g）稀释的一抗，4℃存放24-48 h；吸去抗体，0.01 M KPBS洗5 min×3；
 

5.  加入0.01 M KPBS稀释的的二抗，室温孵育2 h。0.01 M KPBS洗5 min×3；
 

6.  加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2 h，0.01 M KPBS洗5 min×3；蒸馏水迅速冲三次；
 

7.  加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30 min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01 M KPBS终止反应；
 

8.  梯度酒精脱水之后，封片，拍照。