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大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的培养操作步骤

更新时间:2023-03-19  |  点击率:471
  来自能移植的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞。这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。NGF可诱导产生神经表型。这些细胞不合成肾上腺素。PC-12(高分化)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细Chemicalbook胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
  
  大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞培养操作步骤:
  
  1.用盖片镊将盖玻片自75%Z醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
  
  2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
  
  3.在距离紫外灯直射范围内20-30厘米处照射2-3小时;
  
  4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片浸在培养液中;
  
  5.将培养板在5%CO2水浴孵箱中37°C孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
  
  大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞实验要点及说明:
  
  1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
  
  2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
  
  3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
  
  4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
  
  5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
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