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你知道精浆柠檬酸定量试剂盒的正确操作步骤吗

更新时间:2021-09-10  |  点击率:922

    精浆柠檬酸定量测定对于判断精子质量有一定的作用。精浆柠檬酸定量试剂盒的测定原理是柠檬酸与吲哚在酸和加热的情况下形成复合物,该复合物通过96孔板测定仪或分光光度计在470nm处测定吸光值,同时做柠檬酸的标准曲线,通过标准曲线来计算精液中柠檬酸的具体含量,即对柠檬酸进行定量检测。

    精浆柠檬酸定量试剂盒的操作步骤(仅供参考):

    1、制备标准曲线:用ddH20稀释Citrate标准(2.24mM)。取离心管加入Citrate标准(2.24mM)和150μl ddH20混合,即获得Citrate标准;取离心管加入Citrate标准(1.12mM)和150μl ddH20混合,即获得浓度为0.56mM的Citrate标准,依次对倍稀释,分别获得浓度为0.28mM和0.14uM的Citrate标准。

    2、制备样本:离心精液样本,取上层精浆置于新的离心管,储存于-20℃待检。

    3、 样本预处理:解冻去除精子的精浆,在混旋器上充分混匀。取若干新的离心管,每管加入ddH20,用正向置换型加样器加入混匀好的精浆,即获得的预处理样本,每个精浆样本应稀释作为复测。

    4、 样本检测: ① 脱蛋白:向预处理样本中加入Protein Dilution A和B,混匀。 ② 离心:室温放置,离心。 ③ 上样:取上清置转移至离心管中。同时取新离心管加入ddH20作为空白对照,取新的离心管分别加入Citrate标准,即浓度为2.24mM、1.12mM、0.56mM、0.28mM、0.14mM的标准品个2份。 ④ 显色反应:向每管样本中加入Indole Developer,混匀。向每个样本中加入浓盐酸,封口,在通风橱中充分混匀,50℃水浴中加热,混匀,冰水冷却。 ⑤ 测OD值:在通风橱中用正向置换型加样器将250μl液体小心移入96孔板中,以ddH20作为空白管调节零点,用酶标仪或96孔读数板在波长下读取结果。
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