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人凝血因子Ⅲelisa试剂盒应该怎么用?来看这份专业人士操作手册就知道了!

更新时间:2020-12-09  |  点击率:841

    本文是公司专业人员总结的关于人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的操作步骤经验总结,以作为参考希望能够帮助到大家。

    1、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉;

    2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;

    3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟;

    4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用;

    5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干;

    6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外;

    7、温育:操作同3;

    8、洗涤:操作同5;

    9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟;

    10、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色);

    11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值,测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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