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冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒采用的技术特点详细介绍
点击次数:469 发布时间:2018-11-13
   在免疫组化结果的判断时,常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象,经多方研究认为,冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散,肿瘤细胞无限制的生长和生长过速,导致肿瘤中间部分组织血液供给困难,造成缺血坏死,坏死细胞中的抗原由于机体的作用,可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质,这是抗原发生弥散的一种方式。另一种抗原弥散的方式就是,由于组织没有及时的固定所引起的。离体的组织不及时固定,组织就会自溶,抗原就会扩散,这是一非常普通的常识,但要做好却是极不容易。标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间,在这段时间里,有的抗原就可以发生扩散。
 
  在这我简单谈谈冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒实验中移液器的使用,还有实验中反应时间的细节。
 
  冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒的使用方法:
 
  1、设定移液体积:从小量程调节至大量程时,应先调至超过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的度;
 
  2、装配枪头:将移液枪垂直插入吸头,左右旋转半圈,上紧即可;
 
  3、吸液和放液:吸头浸入液面3mm以下,吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准度,慢吸慢放,以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气;
 
  4、吸有液体的移液枪不应平放;
 
  5、移液枪在每次实验后应将刻度调至大量程,让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命。
 
  实验反应时间注意事项:冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒下面我以检测呕吐毒素来作为例子说说我们在检测实需要注意的反应时间小细节。
 
  1、在备孔稀释好待测样品和标准品;
 
  2、上板:应从后一孔上完板开始计时,以确保反应时间;
 
  3、加底物:应从加孔开始计时,以确保加终止液时的反应时间是5分钟。
 
  蜡不溶于水,不与其它的临床使用的抗体相融合。它只能靠特用的试剂,处理足够的时间,才能将其除去。如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起许多弊病,如染色不均匀,阳性物时隐时现,真假难辨,背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短。较受使用者的青睐。
 
  必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性,才能降低背景的染色。
 
  在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶,尤其在红细胞,中性粒细胞,单核细胞嗜酸性细胞,出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制,它们将会在DAB底物的显色时,与HRP一样催化底样,使之显色,使之生成与阳性物一样的黄棕色,造成混乱。为止,在活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒染色前,都必须对内源性过氧化物酶进行抑制。当然,对它们进行彻底的消除是不行的,因为抑制太厉害,对抗原也会有相同的抑制作用。
 
  冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒须适当合理地使用封闭试剂
 
  为了减少背景产生的非特异性染色,在免疫组化染色的过程中,在加入一抗孵育前,常常加入非免疫动物血清,以减少背景的染色,陈尚季等认为:抗体是高度的电荷分子,可能与带有相应电荷的组织成分无特异性地结合。由于这种非特异性结合,将导致标记的部分局部化和胶原的假阳性染色。要用一种不相干的抗体居先处理,可能减少和标记的抗体无特异性结合。
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