冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒的操作规程

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒内质呈淡蓝黑色，外质收缩，剩下部分不着色或色泽更浅。圆形细胞核呈蓝黑色。居中的核仁呈黑色小圆点。核膜较薄，其内侧缘均匀，整齐地排列着一层细小的染色质粒。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红细胞呈蓝黑色采用苏木素染色液进行免疫染色后的复染，操作步骤简便，操作时间短。可以操作步骤简便，操作时间短或培养细胞的染色，或与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。使用苏木素染色液染色后还可以进行免疫染色或其它染料的复染。

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒操作步骤（仅供参考）

　　1、涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与的水混合均匀，涂成一薄层。

　　2、干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。

　　3、固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3~5次，每次1s，温度不宜过高，防止菌体蛋白变性，放置待凉后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

　　4、初染：滴加结晶紫染色液染色1~2min，清水冲洗去染色液。

　　5、媒染：滴加Gram碘液，并覆盖载玻片，室温放置1~2min，水洗。

　　6、脱色：滴加脱色液，摇动10～30s，直至流下的脱色液不出现紫色时为止，立即用水冲去脱色液，终止反应。

　　7、复染：滴加沙黄染色液染色30s~1min，水洗。

　　8、干燥。

　　9、镜检：置油镜观察。

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒注意事项

　　1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。

　　2、取细菌时，应注意自我防护，拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，zui后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

　　3、加热固定涂片时，应注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。

　　4、革兰氏染色的关键在于严格掌握脱色程度，脱色时间应根据经验判断。脱色过度，阳性菌可被误染为阴性菌；脱色不够，阴性菌可被误染为阳性菌。

　　5、待检细菌培养时间也会影响染色效果，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，都常呈阴性反应。

　　6、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。