通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此，能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色液试剂盒体外诊断试剂产品用法：
1.涂片经火焰固定，加（结晶紫溶液）溶液A染1分钟，用清水冲去染液。
2.加（碘液）溶液B染1分钟，水洗。
3.加（95%乙醇）溶液C，不时摇动玻片约10-30秒，至无紫色脱落为止，水洗。
4.加（沙黄复染液）溶液D，染1分钟，水洗。
5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。
革兰氏染色液试剂盒体外诊断试剂微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置/℃/培养/小时。
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