活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光(TMRM)测定试剂盒产品说明书
(中文版)
主要用途
活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光(TMRM)测定试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料,选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色,其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化,即内膜电负性的增高或降低,来分析线粒体内膜功能的完整性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌,即到即用,活体检测,操作简易,性能稳定。
技术背景
四甲基罗丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester;TMRM),为罗丹明衍生物阳离子染料,作为电势测定(potentiometric)荧光探针:具有亲脂性的,且细胞低毒和光稳定; 第二,与线粒体内膜负电极结合而聚集;第三,容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后,被细胞内酯酶切离,产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后,被线粒体俘获,分布和结合在线粒体内膜上,呈现强烈荧光。线粒体膜电位的高低变化决定了TMRM的分布浓度。电位高,TMRM在线粒体的浓度高,显示为强力红色或桔红色;反之,TMRM弥散在胞浆内,荧光减弱表明线粒体膜电位受到损害。
产品内容
染色液(Reagent A) 微升
稀释液(Reagent B) 毫升
清理液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent C)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 染色液(Reagent A)避免光照;有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(GMS12024):用于细胞脱离
*细胞培养液(GMS12052):用于细胞脱落收集
1.5毫升离心管:用于活体细胞线粒体染色的容器
微型台式离心机:用于细胞收集的操作
培养箱:用于染色孵育
(共聚焦)荧光显微镜:用于活体细胞线粒体荧光定性分析
比色皿或96孔板:用于荧光定量分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于活体细胞线粒体荧光定量分析
细胞流式仪:用于活体细胞线粒体荧光分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的 染色液(Reagent A)置入冰槽里融化, 稀释液(Reagent B)放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升 染色液(Reagent A)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升 稀释液(Reagent B),混匀后,在冰槽里静置,并标记为 染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。
一、直接法
亮橘红色荧光;如果强度显著减弱,表明线粒体膜电位受到破坏
二、间接法
选择一、(共聚焦)荧光显微镜观察
选择二、细胞流式仪分析
激发波长 | 488nm |
匹配荧光染料 | 藻红蛋白(phycoerythrin;PE) |
荧光颜色 | 红色 |
散发波长 | 575 |
流式仪通道 | FL2 |
荧光增强 | 膜电位正常 |
选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
注意事项
质量标准
电话
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