MB50047.3.1 v.A
细胞组织蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性荧光定量检测试剂盒产品说明书
(中文版)
主要用途
细胞组织蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过二肽化合物底物z-FR-AMC,在组织蛋白酶L抑制剂的存在下,受到组织蛋白酶B的水解,释放出荧光产物氨甲基香豆素,即采用荧光法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体、植物、昆虫等)组织蛋白酶B(CATHEPSIN B)的特异活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
组织蛋白酶(CATHEPSIN),是一种木瓜酶(papain)类半胱氨酸或天冬氨酸蛋白酶(Cysteine or Aspartic protease),普遍存在于溶酶体细胞器内,在酸性环境下激活,切离各种目标蛋白。根据其结构和底物特异性,组织蛋白酶家属约有十多种成员,包括A、B、C、D、E、G、H、K、L、S等。组织蛋白酶在细胞内蛋白和细胞外蛋白通过内吞进行周转中起着重要作用,同时也是启动和传递细胞凋亡信号的替代机制,以及肿瘤和炎症性组织损伤的病理生理变化。其中组织蛋白酶B(EC 3.4.22.1),又称为CTSB,作为溶酶体的标志性酶蛋白,可以使β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein)转化为β-淀粉样蛋白斑点(β-amyloid plaque)在抗原处理(antigen processing)、肿瘤转移、骨再吸收、细胞内或分泌性调节蛋白周转、卵细胞成熟、细胞凋亡等方面具有重要作用。细胞间接触和细胞外基质成分影响43kd组织蛋白酶原L转化为成熟蛋白。组织蛋白酶B使胶原蛋白、结缔组织蛋白、β-淀粉样前体蛋白等降解。与半胱氨酸蛋白酶抑制剂A和B(Cystatin A和B)、S100A10等蛋白相互反应。组织蛋白酶B异常,将导致阿茨罕默综合症(Alzheimer's disease)、食道肿瘤(esophageal adenocarcinoma)等疾患。基于人工合成的二肽化合物底物z-FR-AMC(z-Phe-Arg-7-amido-4-methylcoumarin;乙酰苯丙氨酰精氨酰氨甲基香豆素),在组织蛋白酶L抑制剂Z-FY(t-Bu)-DMK的存在下,受到组织蛋白酶B的水解,释放出荧光7-氨基-4-甲基香豆素(7-amido-4-methylcoumarin;激发波长360nm;散发波长460nm),来定量测定组织蛋白酶B的特异活性。组织蛋白酶B反应系统为:
CATHEPSIN B
z-FR-AMC → z-FR + AMC
Z-FY(t-Bu)-DMK
产品内容
清理液(Reagent A) 120毫升
裂解液(Reagent B) 10毫升
缓冲液(Reagent C) 2毫升
底物液(Reagent D) 500微升
标准液(Reagent E) 50微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里; 底物液(Reagent D)和 标准液(Reagent E)避免光照和反复冻融;有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
细胞刮脱棒:用于脱离贴壁细胞
微型台式离心机:用于样品沉淀
培养箱:用于反应物孵育
96孔板或比色皿:用于样品荧光测定的容器
荧光酶标仪或荧光分光光度仪:用于样品荧光分析
实验步骤
管号 | 缓冲液(Reagent C) | 标准液(Reagent E) | 标准AMC浓度 |
1 |
| 50微升 | 5微摩尔/升 |
2 | 25微升 | 25微升1号管 | 2.5微摩尔/升 |
3 | 25微升 | 25微升2号管 | 1.25微摩尔/升 |
4 | 25微升 | 25微升3号管 | 0.625微摩尔/升 |
5 | 50微升 | 0 | 0 |
[根据标准曲线获得样品对应AMC浓度(微摩尔/升)X样品稀释倍数]÷ 60(分钟)=纳摩尔/毫升•分钟÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=纳摩尔/毫克•分钟
根据标准曲线获得样品对应AMC浓度(微摩尔/升)X样品稀释倍数]÷ 60(分钟)=纳摩尔/毫升•分钟÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=纳摩尔/毫克•分钟
注意事项
质量标准
电话
微信扫一扫