细胞培养液氧化应激活性氧超氧阴离子比色法定量检测试剂盒

MB10067.4 v.A

  细胞培养液氧化应激活性氧超氧阴离子比色法定量检测试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

  细胞培养液氧化应激活性氧超氧阴离子比色法定量检测试剂是一种旨在通过硝基蓝四氮唑染料，受到超氧阴离子O₂^-的还原，产生不溶性蓝黑*素沉淀，由分光光度仪比色分析，定量检测细胞外超氧阴离子活性氧族的生成和增加的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O^2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H₂O₂）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。染料四氮唑兰（tetrazolium）化合物，包括硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧阴离子O₂^-的直接还原，便产生不溶性蓝黑色甲暨色素，在分光光度仪下（650nm波长），呈现吸光峰值的变化。据此定量检测细胞外超氧阴离子活性氧族的浓度。

产品内容

  染色液（Reagent A）      2毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存  染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，严格避免光照；有效保证6月

用户自备

*细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基

细胞培养箱：用于细胞染色孵育

分光光度仪或酶标仪：用于染色定量

实验步骤

• 准备好待测的细胞培养板的培养细胞
• 分别小心按下表移取多孔细胞培养板里的培养液上清到相应的另一多孔细胞培养板（注意：避免触及细胞）

• 加入适量的  染色液（Reagent A）到上述培养板里的每个培养孔里（见下表）

• 轻轻摇动细胞培养板，混匀
• 放进37℃细胞培养箱里孵育60分钟
• （选择步骤）肉眼观察：溶液呈现蓝黑色，显示超氧阴离子浓度增强

7． 即刻放进分光光度仪测读，波长为650 nm

8． 构建细胞外超氧阴离子活性氧生成曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等

注意事项

• 本产品为100次（96孔板）操作
• 细胞培养操作，须无菌状态下进行
• 操作时，须戴手套
• 孵育时，避免光照
• 如果超氧阴离子活性氧浓度过低，可以延长孵育时间至4小时
• 建议96孔细胞培养板中每孔细胞密度为10⁴细胞
• 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰