细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂盒

MB80070.1 v.A

 细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

 细胞衰老特异性晚期脂褐素铁还原法（SCHMORL）染色试剂是一种旨在使用铁还原法技术，分析细胞样品中晚期脂褐素沉积现象，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的*而经典的技术方法。该技术经过精心改良SCHMORL方法、成功实验证明的。主要适用于动物细胞的的晚期脂褐素检测。广泛应用于细胞生物学研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。  

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，其中脂褐素颗粒聚集增多成为细胞衰老的特征性生物学标记。脂褐素（lipofusin），又称为“磨损（wear and tear）”色素，是一种细胞内与年龄相关的棕黄色荧光胞浆颗粒色素，主要在有丝分裂后细胞的继发性溶酶体内。脂褐素常见于老年人的永恒性非分裂性组织细胞里，例如心脏、肝脏和神经等，尤其在衰老诱导的细胞退变中聚集增多，特别是萎缩的组织。脂褐素来自于氧化的蛋白和脂质，成为细胞衰老中后期的独立指征。脂褐素分为早期和晚期，晚期脂褐素作为较强还原性物质，在铁离子的存在下，使铁*（ferricyanide）转化为亚铁*（ferrocyanide），产生不可溶性普鲁士蓝（Prussian blue）产物，显示蓝色。

产品内容

 清理液（Reagent A）       毫升

 固着液（Reagent B）  毫升

 染色液（Reagent C）  毫升

 酸性液（Reagent D）  毫升

产品说明书     1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent C）避免光照；有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于细胞染色操作

光学显微镜：用于观察染色后的细胞

实验步骤

操作一：细胞载玻片染色

• 取出待测的细胞载玻片或细胞涂片 
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去载玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 固着液（Reagent B）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心移去载玻片上的 固着液（Reagent B）
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 在室温下孵育2分钟
• 小心移去载玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 染色液（Reagent C）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 在室温下孵育10分钟
• 小心移去载玻片上的 染色液（Reagent C）
• 小心将载玻片置入xx毫升 清理液（Reagent A）的小型染色缸里 
• 室温下孵育2分钟
• 取出载玻片片，小心移去载玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 酸性液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心移去载玻片上的 酸性液（Reagent D）
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去载玻片上的 清理液（Reagent A）
• （选择步骤）复染（建议使用 核固红复染试剂盒——GMS40011）
• 放上盖玻片或封片（水相或中性树脂）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：脂褐素阳性细胞呈现蓝色，细胞核呈现红色（如果复染）

操作二：24孔细胞培养板染色

• 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
• 小心抽去每孔里的 清理液（Reagent A）
• 每孔加入xx微升 固着液（Reagent B），覆盖整个生长表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽去每孔里的 固着液（Reagent B）
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗细胞表面
• 在室温下孵育2分钟
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• 每孔加入xx微升 染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面
• 在室温下孵育10分钟
• 小心抽去 染色液（Reagent C）
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗细胞表面
• 在室温下孵育2分钟
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤13至15二次
• 小心加上xx微升 酸性液（Reagent D），覆盖整个生长表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去 酸性液（Reagent D）
• 小心加入xx微升 清理液（Reagent A）
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• （选择步骤）复染（建议使用 核固红复染试剂盒——GMS40011）
• 小心加入xx微升 清理液（Reagent A）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：脂褐素阳性细胞呈现蓝色，细胞核呈现红色（如果复染）

注意事项

• 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
• 本产品还可以染色其它还原性物质，包括黑色素（melanin）、肝胆汁（liver bile）、肠嗜铬细胞（enterochromaffin）等
• 操作时，须戴手套
• 使用时，避免污染母液
•  染色液（Reagent C）避免光照
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
• 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定着色清晰