MB50379.2 v.A
组织甘油激酶(Glycerol kinase)活性酶连续反应光谱法定量检测试剂盒
产品说明书(中文版)
主要用途
组织甘油激酶(Glycerol kinase)活性酶连续反应光谱法定量检测试剂是一种旨在使用甘油激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统中,伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光谱法测定样品中酶活性的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物、人体组织裂解悬液样品的甘油激酶的性活性检测。可用于脂类代谢、能量代谢、蛋白组学、病理生理学等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景
甘油激酶(glycerol kinase;GK;EC2.7.1.30),又称为ATP甘油-3-磷酸转移酶(ATP:glycerol 3-phospho transferase),广泛存在于生物界。甘油激酶催化由ATP提供的磷酸基团,转移到甘油分子上的反应,产生磷酸甘油。哺乳动物中,甘油激酶参与糖和脂类代谢的交接部位的反应;微生物中,甘油激酶帮助利用甘油分子,作为微生物生长所需的碳源。临床上常用于定量检测人体内甘油水平。通常脂肪细胞(adipocyte)缺乏甘油激酶,由甘油三酯降解产生的甘油分子,由血液转运到肝脏后,甘油激酶参与脂类分解(lipolysis)。基于底物甘油分子,在ATP的参与下,受到甘油激酶的磷酸化,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),产生的吸光峰值的变化(340nm),来定量分析甘油激酶活性。其反应系统为:
glycerol kinase
Glycerol + ATP → ADP + α-glycerophosphate
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
(高吸收峰) (低吸收峰)
产品内容
清理液(Reagent A) 60毫升
裂解液(Reagent B) 10毫升
缓冲液(Reagent C) 20毫升
反应液(Reagent D) 2.5毫升
阴性液(Reagent E) 2毫升
底物液(Reagent F) 500微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融; 反应液(Reagent D),避免光照,有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器
(微型)台式离心机:用于样品操作
比色皿:用于光谱分析的容器
分光光度仪:用于光谱分析
培养箱:用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化; 反应液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
二、测定准备
【(样品读数-背景读数)X 1(体系容量;毫升)X样品稀释倍数】÷【0.1(样品容量;毫升)X 6.22(毫摩尔吸光系数 X 10(反应时间;分钟)】=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
单位=微摩尔NADH/分钟
[(样品读数-背景读数)X样品稀释倍数X 0.25(体系容量;毫升)]÷[0.025(样品容量;毫升)X 6.22(毫摩尔吸光系数)X 0.6(光径距离;厘米)X 10(反应时间;分钟)]=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
单位=微摩尔NADH/分钟
注意事项
质量标准
电话
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