管装培养基的实验室制备方法

 

    管装培养基使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置。记录所有相关数据，如质量/体积、pH、制备日期、灭菌条件和制备人员等。

 

    管装培养基使用各别成分制备培养基时，应按照配方准确配制，记录所有细节信息，如；培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便潮源。

 

    1.水

 

    除特定要求，实验室用水的电导率在25℃下应不高于25uS/cm（相当于电阻率≥0.4MΩcm）。

 

    微生物污染应不超过103CFU/mL，低于102CFU/mL。应根GB/T 5750.12或其他有效方法，定期检验微生物的污染。

 

    2.称量和复水

 

    管装培养基称量所需量的脱水培养基（注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物质的培养基粉末），先加入少量水，充分混合（注意避免培养基结块）后再加水至所需的量。

 

    3.溶解和分装

 

    脱水培养基加水后适当加热，并不搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。含琼脂的培养基在加热溶解前应浸泡几分钟。

 

    4.pH的测定和调整

 

    用pH计测定pH,必要时在灭菌前调节pH，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，要求pH的变化不超过0.2pH单位。通常使用浓度约为40g/L（ 约1 mol/ L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液调节pH。如果灭菌后调节pH，溶液需灭菌。

 

    注：商品化培养基在高压灭菌前后pH可能发生明显变化，但使用蒸馏水或去离子水时，灭菌前无需调节pH。

 

    5.分装

 

    将配置好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积至少为体积的1.2倍。

 

    6.灭菌

 

    ①概述

 

    管装培养基和试剂的灭菌通常采用湿热灭菌或过滤灭菌。

 

    有些培养基无需高压灭菌，可煮灭菌。如，含亮绿的肠道菌培养基对光和热特别敏感，应在煮沸后快速冷却，避光保存。同样，一些试剂则不需要灭菌，直接使用（参见相关标准或生产厂商的使用说明）。

 

    ②湿热灭菌

 

    湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行。高压霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培养基的体积超过1000mL，要对灭菌条件进行适当的调整。所有操作均要按照标准和使用说明的规定进行。

 

    注：大容量培养基（＞1000mL）灭菌时可能会造成过度加热。

 

    加热后应采取适当的方式冷却，防止沸溢。这对大容量培养基和敏感性培养基（如含亮绿的培养基）是非常重要的。

 

    ③过滤灭菌

 

    过滤灭菌可以在真空负压或正压条件下进行。使用无菌设备和0.2um孔径的滤膜。将过滤装置的各个部分消毒灭菌，或使用预消毒设备。

 

    一些滤膜上附着蛋白质或其他物质。为达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。

 

    ④监测

 

    应对经湿热或过滤灭菌的培养基进行监测，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行监测。

 

    7.添加剂的制备

 

    制备含有有毒物质（特别是抗生素）时应小心操作，避免因粉末的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应。采用适当的预防措施并小心按照产品使用说明操作。不要使用过期的试剂；抗生素工作溶液现配现用；批量配置的抗生素溶液分装后向冷冻保存，但解冻后的贮存溶液不可再次冷冻；厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的相关资料，也可由使用者自行测定。