细胞外泌体/微囊泡技术介绍

细胞外泌体/微囊泡介绍中文版，外泌体是细胞分泌的纳米囊泡（EV），其直径大小为30-150nm之间，具有闭合的脂质双分子层结构。 它几乎存在于所有体液中，并在其表面以及胞内中携带各种分子（蛋白质，脂质和RNA等物质外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关,由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗.

近年来，研究成果表明，外泌体循环微粒是促成心血管炎症、堵塞与损伤的因素，而过往由于常规设备在微小颗粒检测上的局限性，使循环微粒这一重要因素在过去往往被排出在病因分析之列。Apogee纳米级超高分辨率流式细胞仪，*的100纳米散射光分辨率及10nm的灵敏度，突破外泌体与微囊泡研究瓶颈，前沿科学研究大爆炸！

外泌体检测

常规流式细胞仪小检测细胞直径200-500nm细胞，而检测100-200nm或更小的颗粒时是无法实现。尤其在检测细胞外囊泡、外泌体、微颗粒微小颗粒常规流式更是难以检测到，本文章通过Apogee A50-Micro 超纳米级流式细胞仪检乳腺癌与健康人血液内外泌体免疫标记抗体表达量、培养细胞与血清内外泌体进行对比。证实此款流式是目前检测外囊泡的*能够实现100纳米级以内灵敏度的流式细胞仪。

通常情况下提取外泌体、微囊泡均为分离纯化方法。如超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方法

图A：通过差异离心速率获得乳腺癌MDA-MB-231细胞和人血清中外泌体蛋白。 耗时3小时

图B：通过使用试剂盒方法获得外泌体分离，

图C：通过NTA观察，外泌体的平均大小为89±33nm，表面电荷为约30mV，

图D E F：通过免疫印迹和免疫荧光染色方法分析CD63，CD81和LAMP2B存在，血清中分离外泌体Grp94的不表达情况。

实验证明：传统方法只能获得广泛性、某一类别的外泌体、囊泡及杂质物质，无法针对性、性获得到实验目的蛋白，脂质等。

培养细胞

图A：Apogee A50- Micro*光散射器， 小角度光散射（SALS），中角光散射（MALS）和大角度光散射（LALS）检测细胞内部颗粒，
图D，E  F：Apogee Mix *微珠微珠作为内参，设置阈值。
图G：设置样本空白、同型对照可以观察到MDA-MW-231 MCF-12A细胞外泌体样本的、anti-CD44抗体表达情况。
图H: 应用免疫印迹MDA-MW-231 与MCF-12A细胞对比CD44抗体，β-actin做内参。

实验证明： 超纳米级流式比免疫印迹方法学更、尤其对荧光较弱不会导致不可信数据。

乳腺癌监测

应用流式细胞仪与CD47 -ELISA方法学对比乳腺癌患者与健康人群中监测CD47表达量的动态变化， 可以监测巨噬细胞摧毁癌细胞的能力。

A、C 图：显示健康人对照（A）乳腺癌患者（C）血液标本通过MALS 和LALS 散射光信号读取的散点图。
B、D图： 显示两组样本外泌体CD47表达异常，乳腺癌组CD47明显表达减少，统计学差异P值=0.004说明巨噬细胞启动吞噬效力。
E图：在B、D图个选取N=60人份血液标本。 未配对t检验，P值<0.05.
F图：通过ELISA 测量健康人N=40人份，乳腺癌N=50份，CD47表达量，未配对t 检验，P值<0.01.

实验证明：超纳米级流式无法匹敌的散射光和分辨率可以检测不同细胞领域，通过健康人与乳腺癌患者CD47抗体表达量的不同，可以判定癌症疗效和预后指标。

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