对于冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒工作原理以及注意事项

 

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒是结缔组织染色中经典的一种方法，是显示组织中纤维的主要方法之一，是胶原纤维染色而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

 

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒操作注意事项

 

　　1、 切片脱蜡应尽量干净。

 

　　2、 组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。

 

　　3、 经典 masson 三色染色中，常要求使用试剂（A）染核，也可用 Harris 苏木精染核，但 Harris 苏木精染核后切片颜色不够鲜艳，因为染色目的主要在于区分胶原纤维和肌纤 维，一般也可以省略该染色步骤。

 

　　4、 试剂（B）的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和新旧而定，。

 

　　5、 试剂（E）为 0.2%乙酸水溶液，可使色彩更清晰鲜艳，如果使用量大可自行配制。

 

　　6、 用试剂（F）分化要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色；纤维呈红色即可。分化时间根 据染色深浅而定，一般 1～2min。

 

　　7、 返蓝液常使用氨水水溶液，亦可自行配制 Scoot 促蓝液或 0.1～1%碳酸锂水溶液，该 产品森贝伽有售。

 

　　8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

　　9、 冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒使用场所应通风，并远离火源。

 

　　全组织细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒是设计用来标记活细胞的线粒体的，使之带红色荧光。本试剂盒使用一种专属染料，选择性地在不同膜电位的线粒体中积累。这种线粒体指示剂是一种疏水性复合物，可以轻易地渗透进入活细胞中，且当进入细胞后就被锁定在线粒体中。这种荧光性线粒体指示剂可以在线粒体中保留很长时间，因为该指示剂带有能定位于细胞的基团。

 

　　其关键特征是其染色效率显著性提高。本标记方法十分稳定，需要亲手操作的地方很少。它可以用于许多荧光研究中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。全组织细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒也可以用于多种不同类型的研究中，包括细胞粘附性、趋化性、多药物抗性、细胞活性、细胞凋亡和细胞毒性的研究。本试剂盒提供所有的必需组分和佳细胞标记方法。它适用于增殖型和非增殖型细胞，也可以用于悬浮和贴壁细胞。

 

　　疫印迹重要也是后一步就是酶与底物反应进行检测，本试剂盒以化学荧光发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及辣根过氧化物酶HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。

 

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种冰冻切片组织线粒体的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。

 

　　线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针，是一种含有硫醇氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色，在580nm波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。

 

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒染色原理：

 

　　1、细胞核染色的原理：

 

　　苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

 

　　2、细胞浆染色的原理：

 

　　伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

 

　　3、分化作用：

 

　　冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

 

　　4、返蓝作用：

 

　　分化之后，冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。