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小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒样本处理及要求

更新时间:2018-09-19  |  点击率:964
   小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性核因子κB受体活化因子配基水平。用纯化的人可溶性核因子κB受体活化因子配基抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入类可溶性核因子κB受体活化因子配基,再与HRP标记的类可溶性核因子κB受体活化因子配基抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。
 
  小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的类可溶性核因子κB受体活化因子配基呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人可溶性核因子κB受体活化因子配基浓度。
 
  小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒样本处理及要求:
 
  1、血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
 
  2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
 
  3、尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
 
  4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
 
  5、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
 
  6、小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
 
  7、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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