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纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒操作步骤简单分析介绍

更新时间:2018-03-26  |  点击率:898
   纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒所带 DNA 纯化柱,具有在高盐、低 pH 值情况下吸附 DNA, 低盐、高 pH 值情况下释放 DNA 的 性质 . 该试剂盒能从各个等级的琼脂糖凝胶中很好的回收 50bp-40kb 的 DNA 带 , 回收率高达 85%.目的 DNA 带从凝 胶上切下来后,经特定的溶液 BD 处理,可将含目的带的琼脂糖溶解* , 然后转移到一个 DNA 回收纯化柱上, 经过溶液 PE 快速的洗涤步骤后, DNA 便可用去离子水 (或低盐缓冲液) 洗脱出来, 回收产物可用于 PCR 、 连接、 测序、限制性酶切等应用。纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒还适用于 PCR 产物纯化、酶切产物回收及基因组 DNA 纯化。
  初次使用本试剂盒时,请将 RNase A全部加入到溶液Ⅰ中,均匀混合后 4℃保存。溶液Ⅱ:室温保存,若出现 沉淀,请于 37℃保温溶解,待恢复至室温后使用。其他试剂:室温保存。
  纯化线粒体ADP光谱法定量检测试剂盒操作步骤:
  1. 用 1.5 ml离心管收集 1.5-5ml 菌液, 12000rpm 离心 60秒,弃上清。(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量 )
  2. 加入 250?l溶液Ⅰ/RNase A混合液,漩涡振荡使菌液*重新悬浮。(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的 , 为使 RNA 被 RNase A充分降解 , 让悬浮菌液静置 1-2分钟 3. 250?l溶液Ⅱ,温和反复颠倒混匀 4-10次 , 室温放置 1-2分钟 , 以获得澄清的裂解液。(不可剧烈混和 , 否则会使染色体 DNA 断裂 .)
  4. 加入 350?l溶液Ⅲ,反复颠倒混匀 4-6次 , 12000rpm离心 10分钟。
  5. 将上清置于 DNA 纯化柱中,静置 1-2分钟。
  6. 12000rpm 离心 60秒,弃虑液。(注:此时 DNA 被吸附于 DNA 纯化柱中的硅胶膜上。 )
  7. 加入 500l 溶液 PB,12000rpm 离心 60秒,弃虑液。注:目的是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱 , 得到高质量的 DNA 。如果所需的 DNA 质量要求不是很高此步可以省去 .
  8. 加入 500l溶液 W,12000rpm 离心 60秒,弃虑液。
  9. 可选做步骤 :重复步骤 8, 再用 500ul 溶液 W 洗涤柱子一次 .
  10. 12000rpm 再次离心 60秒,甩干剩余液体。主要是去除残余酒精,以利于 DNA 溶解。
  11. 将 DNA 纯化柱置于新的离心管中,加入适量(50-100?l) Eluent (≥60℃预热)室温放置 2分钟12000rpm离心 60秒,管底即为质粒 DNA 。注:溶液 Eluent 可用无菌双蒸水代替,但其 pH 需为 8.0-8.5, 加入体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。60℃预热,目的是提高产量,温度不需很准,50℃-65℃均可。
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