特殊石蜡切片组织衰老特异性脂褐素靛酚原位直接染色试剂...

 特殊石蜡切片组织衰老特异性脂褐素靛酚原位直接染色试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

 特殊石蜡切片组织衰老特异性脂褐素靛酚原位直接染色试剂是一种旨在使用特殊脱蜡处理和非离子化还原性染料靛酚溶解氧化技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中（zui大程度保留的）脂褐素沉积现象，从而在光学显微镜下观察到红色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的脂褐素检测，但不适用于人体心肌组织和小鼠脑组织的脂褐素检测，与红细胞产生不同染色。广泛应用于细胞生物学研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。  

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，其中脂褐素颗粒聚集增多成为细胞衰老的特征性生物学标记。脂褐素（lipofusin），又称为“磨损（wear and tear）”色素，是一种细胞内与年龄相关的荧光胞浆颗粒色素，主要在有丝分裂后细胞的继发性溶酶体内。脂褐素常见于老年人的永恒性非分裂性组织细胞里，例如心脏、肝脏和神经等，尤其在衰老诱导的细胞退变中聚集增多，特别是萎缩的组织。脂褐素来自于氧化的蛋白和脂质，成为细胞衰老中后期的独立指征。染料二氯酚靛酚（2,6-Dichlorobenzenone-indophenol或2,6-Dichlorophenolindophenol）经过酸化处理还原且非离子化，具有脂溶性，特异性染色组织细胞中的脂褐素，除人体心肌组织和小鼠脑组织外。同时使红细胞呈现蓝色。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此使用非二甲苯类脱蜡，以zui大程度保护组织中的脂质成分是二氯酚靛酚染色的关键。

产品内容

 脱蜡液（Reagent A）          50毫升

 净化液（Reagent B）   10毫升

 清理液（Reagent C）  150毫升

 染色液（Reagent D）    5毫升

产品说明书           1份

保存方式

保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月

用户自备

烘箱：用于石蜡切片处理

小型染色缸：用于样品操作的容器

光学显微镜：用于观察染色后的组织细胞

实验步骤

实验开始前，从－20℃冰箱里取出 染色液（Reagent D），在室温下融化，避免光照。然后进行下列操作。

• 脱蜡处理

• 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
• 放进80℃烘箱，孵育30分钟
• 室温下静置15分钟
• 小心加上500微升 脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的 脱蜡液（Reagent A）
• 重复实验步骤4至6一次
• 小心加上200微升 净化液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的 净化液（Reagent B）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育3分钟
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

二、 样本染色处理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent D），铺满整个切片样品表面（注意：加入前混匀 染色液（Reagent D）；参见注意事项7）
• 室温下孵育5分钟，或直至可见红色，避免光照
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent D） 
• 室温下，小心将切片置入50毫升 清理液（Reagent C）中5次（2秒/次）（注意：参见注意事项8）
• 轻轻移去切片上的 清理液（Reagent C） 
• 放上盖玻片或封片（水相或中性树脂）（注意：参见注意事项9）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：脂褐素阳性细胞呈现红色，非脂褐素细胞呈现无色、蓝色或淡粉红色，红细胞呈现蓝色

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 本产品不适合人体心肌组织和小鼠脑组织染色
• 本产品适合于含有红细胞的样本
• 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
• 使用时，避免污染母液
•  染色液（Reagent D）避免光照；由于溶液较酸，操作时注意安全
• 染色后清洗不宜过久，否则容易褪色
• 封片处理忌用极性脂类溶剂，例如乙醇等，否则会去除色素
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察，放置过久，染色会出现褪色
• 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定着色清晰