食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书

 食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

 食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜食物总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾（potassium persulfate）氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

产品内容

 清理液（Reagent A）     500毫升

 缓冲液（Reagent B）      20毫升

 染色液A（Reagent C1）   1管

 染色液B（Reagent C2）   1毫升

 氧化液（Reagent D）       1毫升

 标准液（Reagent E）     300微升

产品说明书   1份

保存方式

保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升烧杯：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

1、固态食品处理

• 秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封
• 加入8毫升 清理液（Reagent A）
• 搅拌30分钟，充分混匀
• 继续加入 清理液（Reagent A）到终容量为10毫升
• 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒
• 封口膜封口备用

2、液态食品处理

• 移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g
• 移取上清液到新的15毫升锥形离心管
• （选择步骤）可以加入适量的 清理液（Reagent A） 
• （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）
• 置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存

二、标准液准备

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 移取50微升 标准液（Reagent E）到1号管
• 小心移取10微升 缓冲液（Reagent B）和40微升 标准液（Reagent E）到2号管，混匀
• 小心移取20微升 缓冲液（Reagent B）和30微升 标准液（Reagent E）到3号管，混匀
• 小心移取30微升 缓冲液（Reagent B）和20微升 标准液（Reagent E）到4号管，混匀
• 小心移取50微升 缓冲液（Reagent B）到5号管
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

• 样品测读

实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取1毫升 染色液B（Reagent C2）到1管 染色液A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为 染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。

• 准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔
• 分别移取200微升 缓冲液（Reagent B）到96孔板里的每个孔里
• 分别加入20微升 染色工作液 
• 分别加入20微升 氧化液（Reagent D）
• 加入10微升 缓冲液（Reagent B）到空白对照孔
• 加入10微升上述配制的 标准液（Reagent E）到相应标准对照孔里
• 加入10微升裂解样品（100微克食品总量）到样品孔里
• 轻轻摇动96孔板，使其混匀
• 室温下孵育1分钟
• 即刻放进酶标仪里测读：730nm波长
• 分析结果：
  • 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）
  • 空白对照孔为zui大吸光单位（OD730nm）读数
  • 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD730nm）读数
  • 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）
  • 计算样品实际总抗氧化能力

【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）X 0.25（体系容量；毫升） X 样品稀释倍数】÷0.01（样品容量；毫升）＝（微摩尔/升TROLOX等值）

• 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）

【（空白对照孔吸光单位读数－实际吸光单位读数）÷空白对照孔吸光单位读数】X100％

• IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升）

  X（所需样品单位）＝（已知样品单位÷实际抑制百分率）X 50％

注意事项

• 本产品为50次操作，包括标准品操作
• 本产品测试范围为高浓度30至150微摩尔
• 操作时，须戴手套
• 样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行
• 测试前，样品须新鲜收集
• 样品须清澈
• 样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等
• 空白对照孔的吸光读数应为2.0以上，如果低于1.5，不能用于高浓度检测，须增加 染色工作液的室温孵育时间 
•  染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上，建议使用无离子水稀释到2.5至3.0则可
• 样品读数越低，抗氧化能力越高
• 样本量不宜超过20微升
• 可以使用比色皿检测
• 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品浓度
• 如果测试样品很多，建议使用排枪移液
• 如果用户没有730nm波长滤波器，可以使用640nm至810nm之间的任一波长替代；或者使用405nm波长替代
• 本公司提供低浓度测试试剂产品
• 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感