产品搜索
产品目录
联系方式
公司:铭修(上海)生物科技有限公司
联系人:周小姐
电话:86-021-55825868
传真:86-021-55825868
手机:18930233920
邮编:
邮箱:1006454826@qq.com
地址:上海市杨浦区武宁路269号
技术文章
当前位置:首页 > 技术文章 > 食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒产品说明书
食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒产品说明书
点击次数:71 发布时间:2017/12/28

 食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒产品说明书

(中文版)

 

主要用途

 

 食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与,使染料ABTS氧化,在抗氧化剂的存在下,通过分光光度仪,观察其峰值下降的变化,来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox总抗氧化能力,即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜食物总抗氧化能力检测。产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定。

 

技术背景

 

超氧自由基阴离子(superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxyl radical;OH-)、过氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion;ONOO-次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡,甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内,通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasmin;CER)、铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin)等,产生抗氧化能力,即捕获自由基的能力,达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾(potassium persulfate)氧化2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid),diammonium salt;ABTS)产生的ABTS自由基,衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力,在分光光度仪(730nm波长)的帮助下,观察其峰值下降的变化,并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

 

产品内容

 

 清理液(Reagent A)     500毫升

 缓冲液(Reagent B)      20毫升

 染色液A(Reagent C1   1

 染色液B(Reagent C2   1毫升

 氧化液(Reagent D)       1毫升

 标准液(Reagent E)     300微升

产品说明书   1份

 

保存方式

 

保存 清理液(Reagent A)在4冰箱里,其余的保存在-20冰箱里,有效保证6

 

 

用户自备

 

50毫升烧杯:用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于标准样品配制的容器

4台式离心机:用于样品操作

200微升1厘米光径比色皿或96孔板:用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪:用于比色分析

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

1、固态食品处理

  • 秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯,杯口封口膜密封
  • 加入8毫升 清理液(Reagent A)
  • 搅拌30分钟,充分混匀
  • 继续加入 清理液(Reagent A)到终容量为10毫升
  • 过滤纸过滤,去除不溶性固体颗粒
  • 封口膜封口备用

 

2、液态食品处理

  • 移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管
  • 放进台式离心机离心10分钟,速度为1500g
  • 移取上清液到新的15毫升锥形离心管
  • (选择步骤)可以加入适量的 清理液(Reagent A) 
  • (选择步骤)过滤纸过滤(如果离心处理,样品仍然不清澈)
  • 置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存

 

二、标准液准备

 

  • 准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管
  • 移取50微升 标准液(Reagent E)到1号管
  • 小心移取10微升 缓冲液(Reagent B)和40微升 标准液(Reagent E)到2号管,混匀
  • 小心移取20微升 缓冲液(Reagent B)和30微升 标准液(Reagent E)到3号管,混匀
  • 小心移取30微升 缓冲液(Reagent B)和20微升 标准液(Reagent E)到4号管,混匀
  • 小心移取50微升 缓冲液(Reagent B)到5号管
  • 将1至5号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

 

 

管号

 缓冲液(Reagent B)

 标准液(Reagent E)

测定体系

标准 Trolox浓度

1

0微升

50微升

150微摩尔/升

2

10微升

40微升

120微摩尔/升

3

20微升

30微升

90微摩尔/升

4

30微升

20微升 

60微摩尔/升

5

50微升

0

0

 

  • 样品测读

 

实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,移取1毫升 染色液B(Reagent C2)到1管 染色液A(Reagent C1)里,混匀,置于暗室里室温下孵育过夜(16小时)后,标记为 染色工作液避免光照。然后进行下列操作。

 

  • 准备1个96孔板,做好标记:空白对照孔、标准对照孔、样品孔
  • 分别移取200微升 缓冲液(Reagent B)到96孔板里的每个孔里
  • 分别加入20微升 染色工作液 
  • 分别加入20微升 氧化液(Reagent D)
  • 加入10微升 缓冲液(Reagent B)空白对照孔
  • 加入10微升上述配制的 标准液(Reagent E)到相应标准对照孔里
  • 加入10微升裂解样品(100微克食品总量)到样品孔里
  • 轻轻摇动96孔板,使其混匀
  • 室温下孵育1分钟
  • 即刻放进酶标仪里测读:730nm波长
  • 分析结果:
    • 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光单位(OD730nm);横座标(X轴)为标准Trolox浓度(微摩尔/升)
    • 空白对照孔为最大吸光单位(OD730nm)读数
    • 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位(OD730nm)读数
    • 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)
    • 计算样品实际总抗氧化能力

 

【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)X 0.25(体系容量;毫升) X 样品稀释倍数】÷0.01(样品容量;毫升)=(微摩尔/升TROLOX等值)

 

  • 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力(实际抑制百分率)

 

【(空白对照孔吸光单位读数-实际吸光单位读数)÷空白对照孔吸光单位读数】X100%

 

  • IC50:50%抑制率所需的样品单位:TROLOX等值或样品重量(毫克/毫升)或样品容量(微升)

 

  X(所需样品单位)=(已知样品单位÷实际抑制百分率)X 50%

 

注意事项

 

  • 本产品为50次操作,包括标准品操作
  • 本产品测试范围为高浓度30至150微摩尔
  • 操作时,须戴手套
  • 样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行
  • 测试前,样品须新鲜收集
  • 样品须清澈
  • 样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等
  • 空白对照孔的吸光读数应为2.0以上,如果低于1.5,不能用于高浓度检测,须增加 染色工作液的室温孵育时间 
  •  染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上,建议使用无离子水稀释到2.5至3.0则可
  • 样品读数越低,抗氧化能力越高
  • 样本量不宜超过20微升
  • 可以使用比色皿检测
  • 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低, 建议稀释或增加样品浓度
  • 如果测试样品很多,建议使用排枪移液
  • 如果用户没有730nm波长滤波器,可以使用640nm至810nm之间的任一波长替代;或者使用405nm波长替代
  • 本公司提供低浓度测试试剂产品
  • 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感

 

 

电话
86-021-55825868
手机
18930233920
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
 

中国化工仪器网

推荐收藏该企业网站