细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)活性比色法定量检测试剂盒
产品说明书(中文版)
主要用途
细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过三肽化合物底物p-ERG-pNA受到尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂的水解,释放黄色对硝基苯胺,产生吸光峰值的变化,即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体等)尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type Plasminogen Activator;uPA;EC3.4.21.73),又称为尿激酶(urokinase;UK),属于丝氨酸蛋白酶,存在于血液、细胞外基质和尿液中。尿激酶由411氨基酸构成,分子量为54KD,有3个结构域:丝氨酸蛋白酶结构域、kringle结构域和生长因子结构域。其主要的生理性底物为纤维蛋白溶酶原(Plasminogen),即纤维蛋白溶酶(plasmin)的酶原形式(zymogen),切离部位为Cys-Pro-Gly-Arg⊥Val -Val-Gly-Gly-Cys。一旦切离后激活,纤维蛋白溶酶参与细胞蛋白水解过程,包括血栓溶解(thrombolysis)和细胞外基质降解等。uPA与组织重构、修复、血管形成(angiogenesis)性疾病和肿瘤扩散有关。uPA的抑制剂是丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins),即纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂(Plasminogen Activator Inhibitor;PAI)。基于人工合成的三肽化合物底物p-EGR-pNA(pyro-Glu-Gly-Arg-p- Nitroaniline;焦谷氨酸酰甘氨酰精氨酰对硝基苯胺)受到尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂的水解,释放有色对硝基苯胺,在分光光度仪(405nm 波长)下,测定吸光峰值的变化,来定量测定尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂的活性。其反应系统为:
uPA
p-EGR-pNA-HCl → p-EGR-OH + pNA
(黄色)
产品内容
清理液(Reagent A) 120毫升
裂解液(Reagent B) 10毫升
缓冲液(Reagent C) 2毫升
阴性液(Reagent D) 1毫升
底物液(Reagent E) 220微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里; 底物液(Reagent E)避免光照和反复冻融;有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器
1.5毫升离心管:用于样品制备和储存的容器
细胞刮脱棒:用于细胞脱离
微型台式离心机:用于样品沉淀
培养箱:用于反应物孵育
96孔板或100微升1厘米光径比色皿:用于样品比色测定的容器
酶标仪或分光光度仪:用于样品比色分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的 底物液(Reagent E)置入冰槽里融化,避免光照。然后进行下列操作。
[(样品读数-背景读数)X样品稀释倍数X 0.10(毫升,测定容量)]÷[0.005(样品容量,毫升)X 10.5(毫摩尔吸光系数)X 60(分钟)X 0.6(厘米)]=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
单位=微摩尔对硝基苯酚/分钟
[(样品读数-背景读数)X样品稀释倍数X 0.10(毫升,测定容量)]÷[0.005(样品容量,毫升)X 10.5(毫摩尔吸光系数)X 60(分钟)]=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
单位=微摩尔对硝基苯酚/分钟
注意事项
质量标准
电话
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