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冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒采用的操作方法
点击次数:92 发布时间:2017-11-23
     冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒经常使用,碘液不同,这是一种*染色街。其他常用的含有苏木素的染色剂有磷钨酸苏木素染色剂,也就是磷钨酸与苏木素的混合物。冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒经常为组织的研究使用。明矾和三价铁盐常常被用作媒染剂,展示核和细胞质结构。这些媒染剂的原理都是形成媒染剂-染料-组织复合体,从而显示颜色。
    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒内质呈淡蓝黑色,外质收缩,剩下部分不着色或色泽更浅。圆形细胞核呈蓝黑色。居中的核仁呈黑色小圆点。核膜较薄,其内侧缘均匀,整齐地排列着一层细小的染色质粒。核仁与核膜之间可见到核网。被吞噬的红细胞呈蓝黑色采用苏木素染色液进行免疫染色后的复染,操作步骤简便,操作时间短。可以操作步骤简便,操作时间短或培养细胞的染色,或与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。使用苏木素染色液染色后还可以进行免疫染色或其它染料的复染。
    1、冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉;
    2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;
    3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟;
    4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用;
    5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干;
    6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外;
    7、温育:操作同3;
    8、洗涤:操作同5;
    9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟;
    10、人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色);
    11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值,测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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