您好!欢迎访问铭修(上海)生物科技有限公司网站!
全国服务咨询热线:

18930233920

当前位置:首页 > 技术文章 > 活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒须注意事项

活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒须注意事项

更新时间:2017-03-13  |  点击率:1103
  一、为达到活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒化学技术的要求,组织固定越新鲜越好。
  在免疫组化zui后结果的判断时,常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象,经多方研究认为,活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散,肿瘤细胞无限制的生长和生长过速,导致肿瘤中间部分组织血液供给困难,造成缺血坏死,坏死细胞中的抗原由于机体的作用,可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质,这是抗原发生弥散的一种方式。另一种抗原弥散的方式就是,由于组织没有及时的固定所引起的。离体的组织不及时固定,组织就会自溶,抗原就会扩散,这是一非常普通的常识,但要做好却是极不容易。标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间,在这段时间里,有的抗原就可以发生扩散。
  二、组织脱水必须*干净
  组织块取材不能太大过厚,才能较好地完成脱水的过程。如果取材太厚,在较短的时间内脱水不*,将可引起一系列的问题,比如浸蜡不*,切片不好完成,切不完整。由于先天不足,导致后来切片染色的脱落,造成染色的失败,或者由此反复操作,造成年人力物力的浪费,造成病理报告的延期发出等。因此,对取材的要求是除了要求要有艺术性外,即平整、外观好看,还要求适中。
  三、切片必须完整、均匀、平展、无邹折
  活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒应用于免疫组织化学染色的切片,对切片的质量要求较高,切片必须完整,平展、无汽泡,无邹折,这样有利在染色时的冲洗,有利于切片的牢固附贴。如果切片不平展,免疫组化染色后,可出现染色不均匀的现象,颜色深浅不一,不平。如果切片有汽泡切片在烘烤时,由于汽泡的破裂影响了汽泡周围的组织,在其周围可观察到深浅不一的染色。如果切片有邹折,免疫组化染色后,在邹折的地方有深浅不一的颜色,这是一种假阳性,容易引走混淆。
  四、切片的附贴必须牢固,必须使用合适的粘贴剂。
  免疫组织化学染色前的前期准备工作,就是必须对新的载玻片进行处理,新的载玻片表面看起来很干净,有人认为不需要进行任何的处理,都能够适合使用,这是一种错误的想法。新出厂的载玻片,表面复盖着开一层油脂样的物质,如果不加以处理,对切片的附贴是极为不利的。我们的做法是:新的载玻片,放于玻璃清洗液中浸泡4小时甚至过夜,然后取出,经自来水*冲洗后,浸入酒精中达2小时以上,取出擦干备用或烘干也可。
  五、切片必须烘烤附贴牢固,既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片,又不至于破坏抗原。
  活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒应用于免疫组化染色的切片。由于整个过程需经几个阶段的处理,如抗原修复时抗原修复液的沸腾且需持续十几分钟,PBS的反复冲洗,有的甚至于4℃冰箱中孵育达十几小时。因此,对切片的质量要求很高,尤其是切片的附贴程度。
  六、切片脱蜡必须干净,否则将会影响免疫组化染色的zui后结果。
  蜡不溶于水,不与其它的临床使用的抗体相融合。它只能靠特用的试剂,处理足够的时间,才能将其除去。如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起许多弊病,如染色不均匀,阳性物时隐时现,真假难辨,背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须*脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短。较受使用者的青睐。
  七、必须*抑制内源性过氧化物酶的活性,才能降低背景的染色。
  在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶,尤其在红细胞,中性粒细胞,单核细胞嗜酸性细胞,出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制,它们将会在DAB底物的显色时,与HRP一样催化底样,使之显色,使之生成与阳性物一样的黄棕色,造成混乱。为止,在活体细胞RANK免疫组化染色试剂盒染色前,都必须对内源性过氧化物酶进行抑制。当然,对它们进行*的消除是不行的,因为抑制太厉害,对抗原也会有相同的抑制作用。
  八、须适当合理地使用封闭试剂
  为了减少背景产生的非特异性染色,在免疫组化染色的过程中,在加入一抗孵育前,常常加入非免疫动物血清,以减少背景的染色,陈尚季等认为:抗体是高度的电荷分子,可能与带有相应电荷的组织成分无特异性地结合。由于这种非特异性结合,将导致标记的部分局部化和胶原的假阳性染色。要用一种不相干的抗体居先处理,可能减少和标记的抗体无特异性结合。
  九、选择合适的抗体
  至今为止,应用于临床的常用抗体有几十种,在这当中又可分为两种类型。
扫一扫,关注微信
地址:上海市杨浦区武宁路269号 传真:86-021-55825868
©2024 铭修(上海)生物科技有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备16032190号-1